En högpresterande vätskekromatografi, eller HPLC, består kolumnen i en metallcylinder packad med små kvarts pärlor används för att separera ämnen i en blandning, såsom droger, hormoner eller proteiner. Vätskeblandningen pumpas genom kolonnen med hjälp av högt tryck, vilket resulterar i varje komponent i blandningen kommer ut vid olika tidpunkter. Att välja rätt kolumn baserat på den typ av förening som du försöker analysera är viktigt för att uppnå optimal data
Du behöver:.
HPLC-kolonner
1. .
kvarts pärlor i kolumnen är porösa, och att välja porstorleken beror på storleken på molekylerna att skiljas. Små molekyler kräver en porstorlek på mindre än 100 nanometer och stora molekyler, som proteiner, kräver en porstorlek större än 300 nanometer. En mindre porstorlek kommer att öka kolonnens prestanda utan kommer att generera mer systemtrycket.
2.
Bestäm kolonnlängd nödvändigt att bestämma hur många föreningar och vilken typ av föreningar måste du separat. Kolumn längder från 5 till 25 centimeter. Långa kolumner ge bättre upplösning och effektivitet men kräver längre retentionstid och högre tryck. Det är bättre att välja den kortaste kolumnen möjligt med bibehållen tillräcklig upplösning.
3.
Om upplösningen är otillräcklig, vilket minskar den inre diametern på kolonnen kommer att hjälpa. Mindre diameter kommer att öka effektiviteten och upplösningen, men det kräver ett lägre flöde av lösningsmedel och därmed ökar tiden för analys. Tänk på att alla orenheter, såsom smuts, snabbt kommer att täppa till kolonnen med små inre diameter.
4.
Bestäm storleken på kisel pärlor du tänker använda för din kolumn . De flesta kolumner har en storlek partikel på 5 um. Mindre partikelstorlek, t. ex. 3 um, kommer att erbjuda en ökad separering och kommer att minska tiden för analys. Men mindre partiklar kräver en större mängd knuffas blandningen genom kolonnen.
Tips och varningar
- Varje strategi i att välja en kolumn för analys genomför en fördel och nackdel. Det är upp till användaren att välja varje aspekt noggrant för att uppnå en optimal balans i separation, effektivitet och tryck i systemet.
